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影响PE的合成的原因分析 PE的合成基因研究

  来源:互联网  发布时间:11-16

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核心提示:  PE的合成基因以单拷贝存在于绿脓杆菌染色体上,菌体内存在控制PE合成的操纵系统,包括调节基因regA、regB,结构基因toxA.两

  PE的合成基因以单拷贝存在于绿脓杆菌染色体上,菌体内存在控制PE合成的操纵系统,包括调节基因regA、regB,结构基因toxA.两个启动子P1、P2分别引导T1和T2转录子的表达.regAregB的产物RegA、RegB蛋白与环境中的PE共同调节toxA的转录、翻译、分泌PE蛋白。环境中铁离子通过P2启动子抑制regA转录而影响PE的合成.

  PE与靶细胞表面受体结合,通过膜运动聚集于膜特化区,胞膜内陷形成胞内泡,小泡与溶酶体融合,在膜性小泡酸性环境下,毒素疏水区插入膜脂双分子层,形成越膜通道,毒素活性片段由通道进入胞浆,将NAD的ADP核糖基部分转移到延长因子-Ⅱ(EF-2)上,使EF-2糖基化而失活,导致蛋白质合成受阻,细胞死亡。感染的病人恢复期血清中常伴有抗外毒素A抗体滴度升高,抗体滴度高者,存活率也高,可见PE是绿脓感染的重要致病因子。因此,利用PE类毒素和抗毒素进行主动和被动免疫是控制绿脓杆菌感染的有效措施之一.

  鉴于目前国内无PE供应,国外纯化PE毒素价格昂贵,为了满足PE检测、抗PE血清治疗及发病机理研究的需要,我们对PE进行了生产、纯化和鉴定.绿脓杆菌PA103株为国际通用产毒株,由黑龙江省应用微生物研究所惠赠,源自LiuPV;小鼠,上海种,雌性,18±1g,由本院实验动物中心提供;小鼠成纤维母细胞L929由本所二室惠赠.L929细胞株用完全培养基RPMI1640传代培养,将处于对数生长期的L929细胞用胰酶消化1min,吸入细胞管,用RPMI1640洗两次,每次1000rmin离心10min,调整细胞浓度至5×105ml,加入96孔培养板,100μl孔,加入待测PE样品100μl孔,置37℃,5%CO2及饱和湿度下培养48h,用MTT法测定.设培养基及PE阳性对照,每份样品设3个复孔.

 

 

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